酶工程复习材料-简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析

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摘要:酶工程复习材料1.简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点？离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。操作:a上样：上样体积不十分严格。b洗脱:增加溶液的离子强度c梯度洗脱法:改变溶液的pHd再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/LNaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。操作：a凝胶的选择和处理,根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质。将干胶悬浮于5-10倍的蒸馏水中，充分溶胀，抽气，装柱。b柱的选择:采用L/D比值高的柱子，可提高分辨率，但影响流速。c加样:体积不能过多，不超过凝胶床体积的5％，脱盐时可在10％左右。d洗脱:洗脱液与平衡时用的buffer一致。洗速不可过快，保持恒速。e胶的保存:洗脱完毕后，凝胶柱已恢复到上柱前的状态，不必再生处理。亲和层析原理:利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯。2.酶的分类：根据酶的化学组成可将酶分为：1.单纯蛋白酶类：只含有蛋白质成分；2.结合蛋白酶类（全酶）：含有蛋白成分（酶蛋白）和非蛋白成分（辅助因子）全酶=酶蛋白+辅助因子根据酶蛋白结构特点可将酶分为单体酶：以一个独立的三级结构为完整生物功能分子的最高结构形式的酶。寡

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