小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备

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摘要:环境昆虫学报JournalofEnvironmentalEntomology,June2010,32(2):194-198ISSN16740858do:i103969/jissn1674-0858201002008小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备徐红星,陈东旭,张雅林,王敦(西北农林科技大学植保资源与利用教育部重点实验室,陕西杨凌712100)摘要:本实验提取羽化3d的小菜蛾Plutellaxylostella成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因,大小为492bp,Blast结果显示与多种昆虫的GOBP2具有较高的同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化宿主菌TB1(DE3),获得单克隆重组质粒pMAL-c4E-GOBP2。IPTG成功诱导pMAL-c4E-GOBP2表达出约60kDa的融合蛋白。优化诱导条件为3mmol/L终浓度IPTG、6h,可获得大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达11.28105。关键词:小菜蛾;GOBP2;原核表达;多克隆抗体中图分类号:Q966文献标识码:A文章编号:16740858(2010)01019405Cloning,prokaryoticexpressionandpolyclonalantibodypreparationofPlutellaxylostellageneralodorantbindingprotein2(GOBP2)geneXUHon

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