透明质酸酶抑制实验

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摘要:Elson-Morgan改良法一、实验原理透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。二、试剂和仪器1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；2、透明质酸钠：ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；3、Buffer：溶液A（mol/L醋酸冰醋酸溶于1L蒸馏水中）溶液B（mol/L醋酸钠无水醋酸钠或三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中），混合稀释至100ml，配制成PH=的醋酸缓冲液；4、乙酰丙酮溶液：50mlL碳酸钠溶液和乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）5、P-DAB显色剂：对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。6、氯化钙溶液CaCl2：L7、氢氧化钠溶液NaOH：5mol/L样品参考浓度ml三、试验步骤试剂A管（ml）B管（ml）C管（ml）D管（ml）样品蒸馏水透明质酸酶醋酸缓冲液37℃，保温20minCaCl2溶液37℃，保温20min透明质酸钠醋酸缓冲液37℃，保温40min；放置室温10min蒸馏水NaOH溶液乙酰丙酮溶液沸水浴15min；冰浴10min；放置室温10minP-DAB111各管充分振荡后加无水乙醇至8ml1放置室温30min530nm处测吸光值四、计算透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/(C-D)×100%试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲

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