不同亲和色谱纯化抗体的比较

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摘要:本文节选自GEHealthcare《BioProcessNewsletter》2009年第三期的《抗体生产纯化》，综合介绍了ProteinASepharose、ProteinGSepharose、MabSelect、MabSelectXtra、MabselectSure等多种亲和层析介质的特点和应用。作者：苗景赟孙文改通用电气（中国）医疗集团1ProteinASepharose、rProteinASepharose亲和层析介质与抗体的结合目前，约70-80%的抗体纯化使用ProteinA、ProteinG亲和层析。蛋白A(ProteinA)来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域。蛋白A作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性，一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。1个蛋白A分子至少可以结合2个IgG。蛋白A也可以结合另一些免疫球蛋白，如用于某些种属的IgA、IgM的纯化。天然(NativeProteinA)和重组的蛋白A(rProteinA)对于IgG的Fc段有着相似的特异结合。重组的蛋白A经改造后含有一个C末端半胱氨酸，可以单一位点偶联于琼脂糖上，降低了空间位阻，增加了与IgG的结合能力。蛋白A与IgG的结合强度很大成度上依赖于该抗体的种属和亚型，而其动态结合能力则决定于结合强度(解离常数)及传质阻力等多种因素(例如上样时样品在柱内的停留时间)。2ProteinGSepharose亲和层析介质与抗体的结合蛋白G是一种源自链球菌G族的细胞表

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